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解密4种定量测试方法,你知道哪种?

更新时间:2023-04-28      点击次数:755

定量测试方法主要应用于药物、食品、化工等行业,用于定量测定某一特定物质或多种物质。在选择物质定量分析方案时,需要考虑多种关键因素,如样品体系、目标物的性质、样品矩阵、灵敏度和检出限、准确度和精密度、分析速度和成本,操作难度等。以上因素众多,故选择合适的定量分析方法尤其重要。

定量是指利用检测器的响应信号(色谱,光谱峰面积或峰高)与待测组分的量(质量或浓度)成正比定量。

有机目标物定量可按照下图选择定量方案:

仪器方案定好后,为了定量更准确,还需要选择一种或多种适合目标化合物定量分析的方法,在实际操作中,最好对比不同方法的优缺点,并根据实验结果进行调整和优化。

常见的定量分析方法有:归一化法、外标法、内标法、标准加入法等。

一、 归一化法

将所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法,称为面积归一法。

归一法使用时需要满足三个条件

1、样品中所有组分都能从色谱柱流出

2、所有组分都能被检测器检出

3、能测定或查出所有组分相对校正因子

各组分含量的计算公式如下:

式中:C:含量    F:校正因子   A:表示峰面积


若样品中各组分的校正因子相近,可将校正因子消去,当样品中组分是同分异构体或同系物,Fi都很相近。


在计算时通常采用公式如下:

案例1 : 当样品主成分含量大于50%面积归一定量结果如下图

图2 丙酮GC-FID纯度分析



二、 外标法


外标法又称标准曲线法。取待测组分的纯物质配成一系列不同浓度的标准溶液进行色谱分析,绘制峰面积与标样含量的标准工作曲线,并拟合二者的线性方程式。


在计算时通常采用公式如下:

案例2:目标物标准品,用外标法定量时结果如下图

图3 测样品中对二甲苯的准确含量,上图为标准曲线


目前微谱已经积累的成熟外标定量方法见表1

表1 化合物外标法定量典型案例表



三、 内标法


选择适宜的纯物质作为内标物,准确称量后加入待测样品中,根据组分和内标峰面积的比值以及内标加入量进行定量。

在计算时通常采用公式如下:


对内标物的要求




内标物是原样品中不含有的组分,否则会使峰重叠而无法准确测量内标物的峰面积。


内标物的保留时间应与待测组分相近,但彼此能分离(R≥1.5)。


内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。


内标物需要准确称量,其加入量要与被测组分的含量接近。


案例3:内标标准品,为了排除样品基质干扰,用内标法定量时结果如下图


四、 标准加入法

标准加入法又称叠加法,实际是一种特殊的内标法。以待测组分的纯物质为内标物,加入到待测样品中,然后在相同的色谱条件下,测定加入内标物前后待测组分的峰面积,从而计算待测组分的含量。

在计算时通常采用公式如下:

标准加入法每一个样品都要配制三个以上的、含样品溶液和标准溶液的混合溶液,因此,这种方法不适于大批样品的分析。在难以找到合适内标物时,可作为内标法的一种延伸。




不同定量方法的比较

定量分析要求目标组分都必须分离,能被检测器检测到,并且浓度在检测器的线性范围内,不同方法适用于不同要求。

图5 定量方法选择导图


1

外标法是所有定量方法的基础,可以精确进样量的情况下,常规分析通常都采用外标法。

2

归一化法不要求精确进样量,但要求所有组分都必须出峰,或者所有出峰组分的总含量已知。归一化法也可用于外标法定量后,对总量进行归一化误差修正。

3

内标法的关键是要能够找到合适的内标物。内标法的称量引起的误差小于色谱正常定量分析误差,内标和目标物结构差异大时常需要校正。

4

标准加入法常用来辅助判定假阳性,这种方法可以消除基体干扰。

微谱定量分析优势



目标物定量,可快速推荐合适的分析仪器和定量方案。


微谱针对不同样品体系、不同目标物已积累多种成熟的研发方法。


可按需做方法开发和验证。


可根据不同的样品体系,开发和研发合适的前处理方法。



微谱针对客户不同样品体系、不同目标物已积累多种成熟的研发方法,并根据客户的需求提供专业、个性化的分析、检测等一站化服务。







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