解密4种定量测试方法，你知道哪种？

定量测试方法主要应用于药物、食品、化工等行业，用于定量测定某一特定物质或多种物质。在选择物质定量分析方案时，需要考虑多种关键因素，如样品体系、目标物的性质、样品矩阵、灵敏度和检出限、准确度和精密度、分析速度和成本，操作难度等。以上因素众多，故选择合适的定量分析方法尤其重要。

定量是指利用检测器的响应信号（色谱，光谱峰面积或峰高）与待测组分的量（质量或浓度）成正比定量。

有机目标物定量可按照下图选择定量方案：

仪器方案定好后，为了定量更准确，还需要选择一种或多种适合目标化合物定量分析的方法，在实际操作中，最好对比不同方法的优缺点，并根据实验结果进行调整和优化。

常见的定量分析方法有：归一化法、外标法、内标法、标准加入法等。

一、 归一化法

将所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法，称为面积归一法。

归一法使用时需要满足三个条件

1、样品中所有组分都能从色谱柱流出

2、所有组分都能被检测器检出

3、能测定或查出所有组分相对校正因子

各组分含量的计算公式如下：

式中：C：含量    F：校正因子   A：表示峰面积

若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，当样品中组分是同分异构体或同系物，Fi都很相近。

在计算时通常采用公式如下：

案例1 ： 当样品主成分含量大于50%面积归一定量结果如下图

图2 丙酮GC-FID纯度分析

外标法又称标准曲线法。取待测组分的纯物质配成一系列不同浓度的标准溶液进行色谱分析，绘制峰面积与标样含量的标准工作曲线，并拟合二者的线性方程式。

在计算时通常采用公式如下：

案例2：目标物标准品，用外标法定量时结果如下图

图3 测样品中对二甲苯的准确含量，上图为标准曲线

目前微谱已经积累的成熟外标定量方法见表1

表1 化合物外标法定量典型案例表

选择适宜的纯物质作为内标物，准确称量后加入待测样品中，根据组分和内标峰面积的比值以及内标加入量进行定量。

在计算时通常采用公式如下：

标准加入法又称叠加法，实际是一种特殊的内标法。以待测组分的纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入内标物前后待测组分的峰面积，从而计算待测组分的含量。

在计算时通常采用公式如下：

标准加入法每一个样品都要配制三个以上的、含样品溶液和标准溶液的混合溶液，因此，这种方法不适于大批样品的分析。在难以找到合适内标物时，可作为内标法的一种延伸。

定量分析要求目标组分都必须分离，能被检测器检测到，并且浓度在检测器的线性范围内，不同方法适用于不同要求。

图5 定量方法选择导图